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    开云和数明小讲堂 | 新冠(guàn)核(hé)酸检测之PCR技术

    2022-04-07

    开云和数明小讲堂(táng) | 新冠(guàn)核酸(suān)检测(cè)之(zhī)PCR技(jì)术

     

    疫情防控

    科学防疫 开云和数明有芯(xīn)

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    当前上(shàng)海正(zhèng)处于抗新(xīn)型冠(guàn)状病(bìng)毒肺炎疫情防(fáng)控的关(guān)键阶(jiē)段(duàn),在这个没有硝烟的战场上(shàng),及时快速地筛查新冠(guàn)感染者(zhě)并及时(shí)进(jìn)行隔离是阻(zǔ)止新冠(guàn)病毒肆意(yì)蔓(màn)延的最有效且唯一的手段。核(hé)酸(suān)检测是目前(qián)筛查新冠(guàn)感染者最精准、有效、低成(chéng)本的技术方式(shì)。

     

    什么是PCR

    聚合酶(méi)链式反(fǎn)应(Polymerase Chain Reaction), 简称PCR, 又称(chēng)多(duō)聚酶链式反应,是(shì)一项利用DNA双链复制的原(yuán)理,在生物体外(wài)复制特定DNA片(piàn)段的(de)核(hé)酸合成技术(shù)。透过这项技术,可(kě)在短时间内大量扩增目的基因,而不必(bì)依赖大(dà)肠杆菌或(huò)酵(jiào)母菌等生物体。

     

    PCR扩增的三个基本步骤

    1变性:模板DNA经加热至94℃左右并(bìng)保持(chí)一定(dìng)时间(jiān)后(hòu),基(jī)于DNA半保(bǎo)留复(fù)制原理(lǐ),还有碱基互补配(pèi)对原(yuán)则,即复制的过程(chéng)中双链DNA会解链(liàn),由(yóu)双(shuāng)链变(biàn)成(chéng)单链(liàn),为下(xià)轮反应做准备;

    2退火(huǒ):模(mó)板DNA经加热变性成单(dān)链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结(jié)合;

    3延(yán)伸:温(wēn)度再(zài)升至72℃左右(yòu),在(zài)DNA聚合酶(méi)的作用下,把游(yóu)离(lí)的dNTP按照碱基互补配对原则结合到单链(liàn)上,形成(chéng)一(yī)条由(yóu)旧(jiù)链和新链杂(zá)合成的新的双链(liàn)DNA

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    PCR扩增原理:变形-退火-延伸温度循环

     

    理(lǐ)论上,经过上面(miàn)步骤,目标DNA浓(nóng)度可增加(jiā)一倍。重复循环上述过程,可获得(dé)更多的半保留复制(zhì)链,而形成的新链又可成为(wéi)下次循环的模板(bǎn)。每完成一个循环需24分(fèn)钟(zhōng), 仅需23小时就能将目标DNA扩增放(fàng)大几百(bǎi)万倍。

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    全自动(dòng)核酸提(tí)纯及实时荧光(guāng)PCR分析系统

     

    经过以上分析,我们就可以理(lǐ)解为什么核酸检测结(jié)果最快能在几个小(xiǎo)时(shí)内出结果。

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    实时(shí)荧光PCR定量分析       

    PCR扩(kuò)增仪温度控制指标主要(yào)有:温度的准(zhǔn)确性、均匀性、以(yǐ)及升降温速(sù)度。

    1. 温度的(de)准(zhǔn)确性:是指样(yàng)品孔(kǒng)温度与设定温(wēn)度(dù)的(de)一致(zhì)性,它直接关系到实验的成败。因(yīn)而(ér)对PCR扩增仪而言温(wēn)度控制就意味着产(chǎn)品质量。

    2. 温度的均匀性:是指样(yàng)品孔间(jiān)的温度差异(yì),它关系到在不同样品孔进(jìn)行反应结果的一致性(xìng)。

    3. 升降温(wēn)速度:更快的升(shēng)降(jiàng)温速(sù)度,可以(yǐ)有效缩短反应时间和可能的非特异性结(jié)合、反应的时间,从而(ér)提高PCR反应特(tè)异(yì)性。

     

    相(xiàng)较于传统的相(xiàng)对稳定耐用(yòng)的机械式(shì),新的半导体温控技术——TEC温度控制技术具有(yǒu)升(shēng)降温更快(kuài)速的优势,已经(jīng)成为PCR扩增(zēng)仪的首选温度控制技术。

     

    半导(dǎo)体制(zhì)冷器(qì) (Thermo Electric Cooler,简称 TEC) 是利用半导体材料的帕尔(ěr)贴效应制成的。如(rú)图下所示,帕(pà)尔帖(tiē)效(xiào)应是指当直流电流通过两(liǎng)种半(bàn)导体材料组成的电偶时,其一端吸(xī)热,一端放热的现象。TEC 包(bāo)括一些 P 型和 N 型对(组),它们(men)通(tōng)过电(diàn)极连在一起,并且夹在两个陶瓷电极之间,当有电流从(cóng) TEC 流过时(shí),电流产生的热量会从 TEC 的 一侧(cè)传到另(lìng)一侧,在 TEC 上(shàng)产生侧和冷(lěng)侧,这就是 TEC 的(de)加热与致冷原(yuán)理 

     

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    帕尔帖效应,PN 节以及热流动示意图

     

    PCR扩增仪(yí)一般具(jù)有(yǒu)两种(zhǒng)温控模式,即模(mó)块(kuài)温控模式(Block-control)和反应管温控模式(tube-control)。管内样品的温度无法与温控模块同时达到预设温度,特别是PCR反应中的孵育过程一般为30秒或(huò)更短,如果采(cǎi)用只有模块(kuài)温控模式的话,反(fǎn)应混(hún)合物(wù)孵(fū)育的时间(jiān)与程(chéng)序(xù)设定的时间会(huì)有相当(dāng)大(dà)的差距。为了达到反应管内部温度精确控制,需采用(yòng)反应管控(kòng)制模(mó)模(mó)式,通过温(wēn)度控制算法进行参数标定和补偿,确保反应混合物按照程序设定的(de)时间维持预设温度。

     

    科(kē)技(jì)战,开云和数明在行动

    面对近(jìn)期香(xiāng)港、深圳、上海等地奥密克戎的快速扩(kuò)散(sàn),核酸检测(cè)能力在数量和速度方面都(dōu)面临着极大的考验。开云和数明(míng)半导体积极发挥了科技技术(shù)方面的(de)优(yōu)势(shì),组(zǔ)织技术专家研究PCR扩增技(jì)术的优化解决(jué)方案,以功率器(qì)件门极驱(qū)动芯片和(hé)TEC控(kòng)制器为(wéi)着力点,优先保障芯(xīn)片供应和交付,与客户一起助力抗疫(yì),共克时艰(jiān)。

     

    开云和数明半(bàn)导体自研的20V-600V耐压全系列的低边、半桥、三相(xiàng)半(bàn)桥(qiáo)等功率管门极驱动芯片(SLM2103SSLM2136等)可用于驱动TEC,协助PCR扩增仪(yí)器(qì)客户快速、方便地完成系统设(shè)计,在当前半导体供(gòng)应短缺时期,可以满足客户设计方(fāng)案的快速变更、验证与量产。

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    600V耐压半桥功率器(qì)件驱动芯片工作示意图

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    600V耐压三相(xiàng)半(bàn)桥(qiáo)功率(lǜ)器件驱动芯片工作示意图

     

    开云和数明半导(dǎo)体的单芯片(piàn)TEC控制器(qì)产品——SLM8833/8834/8835 集成(chéng)了TEC驱动电路、低温飘高精度温度误差放(fàng)大(dà)器(qì)及环(huán)路补偿(cháng)电路、温(wēn)度设(shè)定(dìng)与(yǔ)传感电路(lù),采(cǎi)用高效的单(dān)电(diàn)感架构,实(shí)现更(gèng)紧凑、更高的转换效率及更低的噪声;其中功率级集成了超低阻抗的MOSFET,损耗更低寿命(mìng)更久;同时匹配模拟PID与数字PID两(liǎng)种(zhǒng)温控(kòng)模式(shì),以满足客(kè)户PCR扩增(zēng)仪的(de)小型化创新设计需求(qiú)

     

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    SLM8834 构成的 TEC 系统框图

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    模拟PID温控器模式 

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    数字PID温控模式

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    资质加持(chí)丨(shù)数(shù)明半导体获得 ISO 26262 功(gōng)能安(ān)全(quán)管理体系 ASIL D 等级认证证书

    资质加持丨开云和数明半导(dǎo)体获得 ISO 26262 功能安全(quán)管理(lǐ)体系 ASIL D 等级认(rèn)证证(zhèng)书

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